The Lucerne Protocol for the Production of Autologous Serum Eyedrops

Abstract

Background There are a variety of protocols for manufacturing autologous serum (AS) eye drops. The Lucerne protocol for the production of AS eye drops uses a slightly reduced gravitational (g)-force and time for the centrifugation process (2500 × g for 10 minutes), compared to previously published optimised protocols, to obtain high levels of epitheliotropic growth factors (3000 × g for 15 minutes). The goal of this study was to compare the concentrations of growth factors, albumin and lysozyme in autologous serum eye drops manufactured with these protocols.

Material and Methods Blood from 5 healthy volunteers was placed in plastic tubes without an anticoagulant. Tubes from each donor were left in a vertical position for 2 hours at room temperature to facilitate coagulation, followed by centrifugation at either 2500 × g for 10 minutes or at 3000 × g for 15 minutes at room temperature. The serum levels of beta nerve growth factor (β-NGF), transforming growth factor β1 (TGF-β1), epidermal growth factor (EGF), hepatocyte growth factor (HGF), platelet-derived growth factor BB (PDGF-BB) and vascular endothelial growth factor A (VEGF-A) were measured in triplicate with a multi-analyte Simple Plex platform. The Simple Plex cartridge allows each sample to be run in triplicate for each analyte and prevents any interaction between the antibody components for each biomarker. The serum level of albumin was measured by turbidimetric immunoassay Tina-quant and of lysozyme by single radial immunodiffusion assay.

Results For all analytes, the reduced g-force and centrifugation time did not result in a significant difference in serum levels.

Conclusions The Lucerne protocol for the production of autologous serum eye drops with reduced g-force and a shorter centrifugation time does not affect the concentrations of the main epitheliotropic growth factors, albumin and lysozyme, in AS eye drops.

Zusammenfassung

Hintergrund Es gibt verschiedene Protokolle zur Herstellung von Eigenserum-Augentropfen. Das Luzerner Protokoll zur Herstellung von Eigenserum-Augentropfen benutzt eine leicht reduzierte Zentrifugierungskraft und eine kürzere Zeitspanne (2500 × g, 10 Minuten) im Vergleich zu den früher publizierten optimierten Protokollen (3000 × g, 15 Minuten), um epitheliotrope Wachstumsfaktoren zu erhalten. Ziel dieser Studie war es, die Konzentrationen von Wachstumsfaktoren, Albumin und Lysozym in mit diesen Protokollen hergestellten Eigenserum-Augentropfen zu vergleichen.

Material und Methoden Es wurden Plastikröhrchen mit Blutproben von 5 gesunden, freiwilligen Spendern ohne Beigabe eines Antikoagulans gefüllt. Die Röhrchen wurden 2 Stunden lang senkrecht bei Zimmertemperatur gehalten, um die Koagulation anzuregen. Danach wurden die Röhrchen entweder 10 Minuten lang mit 2500 × g oder 15 Minuten lang mit 3000 × g bei Zimmertemperatur zentrifugiert. Die Serumspiegel der Wachstumsfaktoren β-NGF, TGF-β1, EGF, HGF, PDGF-BB und VEGF-A wurden mithilfe eines Simple-Plex-Systems für mehrere Analyten gemessen. Mit der Simple-Plex-Patrone wird jede Blutprobe 3 × für jeden Analyten getestet, und es kommt zu keiner Interaktion zwischen den Antikörperkomponenten der jeweiligen Biomarkern. Der Albuminserumspiegel wurde mit dem Tina-quant-Immunoassay und der Lysozymserumspiegel mit einem radialen Einfachimmundiffusionstest gemessen.

Ergebnisse Die Reduzierung der Zentrifugierungskraft und -zeit führte zu keinem signifikanten Unterschied der Konzentrationen der Analyten im Serumspiegel.

Schlussfolgerungen Die Konzentration der wichtigsten epitheliotropen Wachstumsfaktoren sowie von Albumin und Lysozym in den mit Luzerner Protokoll hergestellten Eigenserum-Augentropfen bleibt unverändert hoch.

Key words

Lucerne protocol - autologous serum eye drops - production protocol - centrifugation - growth factors

Schlüsselwörter

Luzerner Protokoll - Eigenserum-Augentropfen - Herstellungsprotokoll - Zentrifugierung - Wachstumsfaktoren

Publication History

Received: 25 September 2020

Accepted: 29 December 2020

Article published online:
30 April 2021

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