Methoden der Autoantikörperdiagnostik – wann Immunfluoreszenztest, wann ELISA?

Die Autoantikörperbestimmung gehört zu den Klassifikations- und/oder Diagnosekriterien für einige Autoimmunerkrankungen und nimmt einen relevanten prädiktiven Wert ein, denn viele Autoantikörper sind bereits Jahre vor dem klinischen Auftreten einer Krankheitsmanifestation nachweisbar. Diese Übersicht stellt verschiedene diagnostische Immunoassays vor, die üblicherweise in der aktuellen Laborpraxis zum Nachweis von Autoantikörpern verwendet werden.

Abstract

The detection of circulating autoantibodies against a variety of structural and functional molecules present in ubiquitous or tissue-specific cells is critical to the diagnosis of many autoimmune diseases (systemic – such as systemic rheumatic diseases – and organ-specific diseases). In particular, the determination of autoantibodies is one of the classification and/or diagnostic criteria for some autoimmune diseases and has a relevant predictive value, since many autoantibodies can be detected years before the clinical manifestation of a disease.

The identification of these antigen-antibody systems and the simultaneous development of laboratory methods for detecting and measuring autoantibodies are considered one of the milestones in the history of clinical immunology over the last 60 years. Many different immunoassay methods have been developed and used in laboratory practice, from the early conventional (or monoplex) analytical methods that can detect single autoantibodies to the newer multiplex platforms that can quantify dozens of molecules. Various diagnostic immunoassays commonly used in current laboratory practice for the detection of autoantibodies are presented in this review.

Kernaussagen

• Die gebräuchlichsten Autoantikörper-Nachweistechniken sind: indirekte Immunfluoreszenz (IIF), Enzymimmunoassays (EIA, ELISA), Immunoblot (Western-Blot), Dot-Blots (Line-Assays), Chemilumineszenz-Assays, Multiplex-Assays.

• Die meisten Autoantikörper (i.a. ACPA, Rheumafaktoren, Anti-Cardiolipin-Ak, Myositis-spezifische Antikörper, etc.) werden exklusiv mittels antigenspezifischer Immunoassays bestimmt.

• Im Rahmen einer Stufendiagnostik zur Abklärung von Kollagenosen gilt die indirekte Immunfluoreszenz, gefolgt von einem antigenspezifischen Immunoassay als „Goldstandard“ für die ANA-Testung.

• Das ANA-Muster führt dabei nur ausnahmsweise zur Identifikation der jeweiligen Autoantikörper-Spezifität, sondern es weist lediglich die Richtung für die dann noch notwendige ANA-Folgediagnostik mit den antigenspezifischen Methoden.

• Die neuen internationalen Konsensusempfehlungen zur ANCA-Testung empfehlen den bevorzugten Einsatz qualitativ hochwertiger antigenspezifischer (Proteinase 3- bzw. Myeloperoxidase-ANCA-)Immunoassays als Screening-Untersuchung für die Diagnose einer AAV.

• Voraussetzung für den optimalen Einsatz der Autoantikörper-Bestimmung und damit die richtige Interpretation der Ergebnisse sind genaue Kenntnisse über Leistungsfähigkeit und Limitationen der einzelnen Antikörper und deren Nachweismethoden. Die Vortestwahrscheinlichkeit sollte bekannt sein. Außerdem muss die Beurteilung der Autoantikörper-Testergebnisse im Kontext der Symptome und klinischen Befunde erfolgen.

Schlüsselwörter

Autoantikörper - Methoden - indirekte Immunfluoreszenz - ELISA - ANA - ANCA

Keywords

autoantibodies - methods - indirect immunofluorescence - ELISA - ANA - ANCA

Publikationsverlauf

Artikel online veröffentlicht:
27. Februar 2023

• Literatur

• 1 Houen G. Autoantibodies as Diagnostic Tools. Methods Mol Biol 2019; 1901: 1-11
• 2 Gruber R, Thomas L. Autoimmunität und Autoantikörperdiagnostik. Labor & Diagnose 2020.. Zugriff am 22. November 2022 unter: https://www.labor-und-diagnose-2020.de/k25.html
• 3 Krummenacher M, Lee FJ, Wienholt L. et al. Lack of standardisation in interpretation and reporting of autoantibody assays: a survey analysis of Australasian laboratories with focus on line immunoassays. Pathology 2021; 53: 883-888
• 4 Agmon-Levin N, Damoiseaux J, Kallenberg C. et al. International recommendations for the assessment of autoantibodies to cellular antigens referred to as antinuclear antibodies. Ann Rheum Dis 2014; 73: 17-23
• 5 Sack U, Conrad K, Csernok E. et al. Autoantikörpernachweis mittels indirekter Immunfluoreszenz an HEp-2-Zellen. Dtsch Med Wochenschr 2009; 134: 1278-1282
• 6 Sternbæk L, Friis T, Houenet G. et al. Determination of Autoantibodies by Line Immunoblotting. Methods Mol Biol 2019; 1901: 255-262
• 7 Fritzler MJ, Fritzler ML. Microbeads-based technologies in diagnostic autoantibody detection. Expert Opin Med Diagn 2009; 3: 81-89
• 8 Grossmann K, Roggenbuck D, Schröder C. et al. Multiplex assessment of non- organ-specific autoantibodies with a novel microbeads based immunoassay. Cytometry 2011; 79: 118-125
• 9 Au EY, Ip WK, Lau CS. et al. Evaluation of a multiplex flow immunoassay versus conventional assays in detecting autoantibodies in systemic lupus erythematosus. Hong Kong Med J 2018; 24: 261-269
• 10 Binder SR. Autoantibody detection using multiplex technologies. Lupus 2006; 15: 412-421
• 11 Rose T, Dörner T. Antinukleäre Antikörper in der Diagnostik rheumatischer Erkrankungen. Z Rheumatol 2020; 79: 447-458
• 12 Bizzaro N. Autoantibody profiles in autoimmune rheumatic diseases. Mediterr J Rheumatol 2019; 30: 86-89
• 13 Bossuyt X, De Langhe E, Borghi MO. et al. Understanding and interpreting antinuclear antibody tests in systemic rheumatic diseases. Nat Rev Rheum 2020;
• 14 Infantino M, Carbone T, Brusca I. et al. Current technologies for anti-ENA antibody detection: State-of-the-art of diagnostic Immunoassays. J Immunolog Methods 2022; 507: 113297
• 15 Csernok E, Hellmich B. ANCA-Diagnostik bei Vaskulitiden [ANCA diagnostics in vasculitis]. Z Rheumatol 2020; 79: 669-678
• 16 Csernok E, Damoiseaux J, Rasmussen N. et al. Evaluation of automated multi-parametric indirect immunofluorescence assays to detect anti-neutrophil cytoplasmic antibodies (ANCA) in granulomatosis with polyangiitis (GPA) and microscopic polyangiitis (MPA). Autoimmun Rev 2016; 15: 736-741
• 17 Damoiseaux J, Csernok E, Rasmussen N. et al. , Detection of antineutrophil cytoplasmic antibodies (ANCAs): a multicentre European Vasculitis Study Group (EUVAS) evaluation of the value of indirect immunofluorescence (IIF) versus antigen-specific immunoassays. Ann Rheum Dis 2017; 76: 647-653
• 18 Bossuyt X, Cohen Tervaert JW, Arimura Y. et al. Revised international consensus statement on testing of anti-neutrophil cytoplasm antibodies in small vessel vasculitis. Nature Rev Rheumatol 2017; 13: 683-692
• 19 Shiroshita A, Oda Y, Takenouchi S. et al. Accuracy of Anti-GBM Antibodies in Diagnosing Anti-Glomerular Basement Membrane Disease: A Systematic Review and Meta-Analysis. Am J Nephrol 2021; 52: 531-538
• 20 Delft MAM van, Huizinga TWJ. An overview of autoantibodies in rheumatoid arthritis. J Autoimmun 2020; 110: 102392