Antigen-Nachweis des „Marburg-Virus” in den Organen infizierter Meerschweinchen durch Immunfluoreszenz

Zusammenfassung

Die direkte Immunfluoreszenz-Methode wurde angewandt, um in den Organen von Meerschweinchen, die mit dem „Marburg-Virus” infiziert waren, das Erregerantigen nachzuweisen und zu lokalisieren. Bei Färbungen mit Konjugaten von vier verschiedenen Rekonvaleszenten-Seren und von einem Meerschweinchen-Immunserum konnten intra- und extrazellulär gelegene Antigenstrukturen von unterschiedlicher Form und Größe mit Durchmessern zwischen weniger als 1 μ bis 5 μ und gelegentlich 10 μ dargestellt werden. Das intrazelluläre Antigen war ausschließlich im Zytoplasma lokalisiert. Wir konnten Antigen in Lebern, Milzen, Lungen, Hoden und im Peritonealexsudat der infizierten Tiere nachweisen. Der Antigengehalt der Organe stieg mit zunehmender Adaptierung des Erregers an den Wirt im Verlauf der ersten Meerschweinchen-Passagen stark an. Die Immunfluoreszenz lieferte weiterhin einen wesentlichen Beitrag zur serologischen Identifizierung des Erregers. Mit den Konjugaten von vier verschiedenen Rekonvaleszenten-Seren ließen sich stets die gleichen Antigenstrukturen anfärben. Färbungen mit einem Meerschweinchen-Immunserum, welches von der Arbeitsgruppe um C. E. Gordon-Smith in Porton/England hergestellt und von uns mit Fluorescein konjugiert wurde, führten zu den gleichen Resultaten. Da wir überdies auch in den Tests von einem der in Frankfurt von May und Knothe infizierten Meerschweinchen Antigen nachgewiesen haben, kann die Identität der in Marburg/L., Porton und Frankfurt/M. unabhängig voneinander gewonnenen Isolate als gesichert angesehen werden.

Summary

Direct immunofluorescence demonstrated and localized the antigen of the causative microorganism in the organs of guinea-pigs infected by the “Marburg virus”. Staining with conjugates of four different convalescent sera and of an immune serum from one guinea-pig demonstrated intra- and extra-cellular antigens of different form and size, their diameter ranging from 1 to 5 μ and occasionally even 10 μ. The intra-cellular antigen was always located in the cytoplasm. Antigens were present in liver, spleen, lungs, scrotum and the peritoneal exudate of infected animals. The antigen content of the organs increased with increasing adaptation of the causative organism to the host and in the course of the first guinea-pig passage. The conjugates of the four different convalescent sera always stained the same antigen structure. Staining with a guinea-pig immune serum, obtained from C. E. Gordon-Smith (Porton, England) and his collaborators and conjugated by us with fluorescein gave the same results. Antigens were also demonstrated in one of the guinea-pigs infected in Frankfurt by May and Knothe: the independently isolated organisms in Marburg, Porton and Frankfurt are presumed to be identical.

Resumen

Comprobación por inmunofluorescencia del antígeno del “virus de Marburgo” en los órganos del conejillo de Indias infectado

Con objeto de comprobar y localizar el antígeno del agente provocador en los órganos de conejillos de Indias infectados con el “virus de Marburgo”, se empleó el método directo de inmunofluorescencia. En coloraciones con conjugados de cuatro sueros diferentes de reconvalecientes y de un inmunosuero de conejillo de Indias se pudieron exponer las estructuras intra y extracelular del antígeno de diferente forma y tamaño con un diámetro de, por lo menos, 1 μ a 5 μ y, ocasionalmente, 10 μ. El antígeno intracelular se hallaba localizado exclusivamente en el citoplasma. Nosotros pudimos comprobar antígenos en el hígado, bazo, pulmones, testículos y exudado peritoneal de los animales infectados. El contenido de antígeno de los órganos crecía intensamente en el curso de los primeros pases en conejillos de Indias a medida que aumentaba la adaptación del agente provocador en el huésped. La inmunofluorescencia sigue siendo una aportación esencial para la identificación serológica del agente provocador. Con los conjugados de cuatro sueros diferentes de reconvalecientes se pudieron colorear siempre las mismas estructuras del antígeno. Coloraciones con un inmunosuero de conejillos de Indias, que fue preparado por el equipo de trabajo de C. E. Gordon-Smith en Porton/Inglaterra y conjugado con fluoresceína por nosotros, condujeron a los mismos resultados. Como aquí, además, hemos comprobado antígenos en el test de uno de los conejillos de Indias infectados en Francfort por May y Knothe, puede admitirse con seguiridad la identidad de los gérmenes aislados, independientes unos de otros, en Marburgo/L, Porton y Francfort/M.