Makrophagencluster exprimieren MMP-9 an der Tumorinvasions-front des HCC in der Abcb4-/- -Maus

Einleitung und Zielsetzung: Matrix Metalloproteinasen (MMP) sind entscheidend am Wachstum und der Metastasierung maligner Tumoren beteiligt [1]. Es konnte gezeigt werden, dass sowohl humane Hepatomzellen als auch maligne transformierte Hepatozyten des HCC eine vermehrte Expression von MMP-9 aufweisen. Neben den eigentlichen transformierten Zellen besitzt das umgebende Tumorstroma eine entscheidende Bedeutung für das Invasions- und Metastasierungsverhalten maligner Tumoren [2]. Das Ziel der vorliegenden Arbeit war die Untersuchung der MMP-9 Expression im Tumorstroma des HCC im Karzinogenesemodell der Abcb4 ^-/--Maus [3].

Methoden: Für die Untersuchungen wurden BALBc-Abcb4 ^-/--Mäuse in unterschiedlichem Lebensalter anästhesiert und per zervikaler Dislokation getötet. Anschließend wurde Lebergewebe aus dem Grenzbereich des HCC zum umgebenden Tumorstroma für immunhistochemische Untersuchungen fixiert. Die Kryoschnitte wurden zunächst mit Alexa488- und Alexa568-markierten Zweitantikörpern auf MMP-9 und Kollagen I gefärbt. Nach Bleichen des Alexa568 Farbstoffes erfolgte die Visualisierung des Makrophagenmarkers F4/80 mit Alexa568-markierten Zweitantikörpern.

Ergebnisse: Im Alter von 12 Monaten wiesen nahezu alle BALBc-Abcb4 ^-/--Mäuse solitäre oder multiple HCCs auf. Mit der beschriebenen Modifikation der konventionellen Immunhistochemie gelang die spezifische Fluoreszenzfärbung von drei antigenen Strukturen nebst Zellkernen in einem einzigen Kryoschnitt. Makrophagen des Tumorstromas konnten als zellulärer Ursprung von MMP-9 im Bereich der Tumorinvasionsfront identifiziert werden.

Schlussfolgerung: 1. MMP-9 ist an der hepatischen Karzinogenese beteiligt und wird im Bereich der Tumorinvasionsfront von Makrophagen gebildet. 2. Die beschriebene Methodik zur gleichzeitigen Visualisierung von drei Antigenen und Zellkernen in einem Kryoschnitt stellt eine einfache und leistungsfähige Erweiterung der konventionellen Immunhistochemie dar.

Literatur: 1. Roeb E, Schleinkofer K, Kernebeck T, Pötsch S, Jansen B, Behrmann I, Matern S, Grötzinger J. The matrix metalloproteinase 9 (mmp-9) hemopexin domain is a novel gelatin binding domain and acts as an antagonist. J Biol Chem 2002; 277(52): 50326-32. 2. Marx J. Science 2008;320(5872):38-41. 3. Henkel C, Roderfeld M, Weiskirchen R, Berres ML, Hillebrandt S, Lammert F, Meyer HE, Stühler K, Graf J, Roeb E. Changes of the hepatic proteome in murine models for toxically induced fibrogenesis and sclerosing cholangitis. Proteomics 2006;6(24):6538-48.

HCC - Immunhistochemie - MMP