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DOI: 10.1055/s-0031-1296987
Determination of α-Tocopherol in Plasma by High Performance Liquid Chromatography with Fluorescence Detection and Stability of α-Tocopherol under Different Conditions
Publication History
Publication Date:
25 December 2011 (online)
Summary
In order to study the clinical effects of the antioxidant α-tocopherol (tocofersolan, CAS 30999-06-5) a simple, robust, sensitive and reliable high performance liquid chromatography (HPLC) method using fluorescence detection for the daily measurement of α-tocopherol concentration in plasma is described. Several methods of HPLC analysis using fluorescence techniques are published, however, investigations of the stability of α-tocopherol during sample preparation under different conditions are relevant in the routine measurements and have to date not been reported.
Therefore a modified method, both sensitive and robust, qualified for the day-by-day measurement of α-tocopherol in plasma was established and the stability of α-tocopherol during sample preparation was analysed under different conditions. This method enables the complete separation of α-tocopherol from other compounds within 14 min. In addition, investigations on the stability of α-tocopherol during sample preparation showed the necessity of rapid sample preparation without delay. Prepared samples can be stored in liquid nitrogen for at least 56 days.
Zusammenfassung
Bestimmung von α-Tocopherol in Plasma mit Hilfe der Hochdruckflüssigkeits-Chromatographie in Huoreszenzdetektion sowie seiner Stabilität unter verschiedenen Bedingungen
Es wird eine in der Durchführung einfache, zuverlässige und empfindliche Methode zur Bestimmung von α-Tocopherol (Tocofersolan, CAS 30999-06-5) in Plasma mittels Hochdruckflüssigkeits Chromatographie (HPLC) in Fluoreszenzdetektion beschrieben, mit deren Hilfe sich die a-Tocopherol-Plasmakonzentration problemlos täglich bestimmen läßt. Die engmaschige Konzentrationsbestimmung des Antioxidans α- Tocopherol ist zur Beurteilung des aktuellen Antioxidantienstatus und zur Untersuchung klinischer Effekte nach Substitution bei postoperativen/posttraumatischen Patienten sinnvoll. Verschiedene Methoden der α- Tocopherol-Bestimmung mittels HPLC in Huoreszenzdetektion wurden bislang beschrieben. Untersuchungen zur Stabilität des Antioxidans während der Probenaufarbeitung fehlen, sind jedoch für die klinische Anwendung relevant.
Daher wurde eine modifizierte Methode zur α-Tocopherol-Bestimmung im Plasma etabliert und die Stabilität der venösen Proben während der unterschiedlichen Aufarbeitungsschritte überprüft.
Die Methode ermöglicht bei kurzer Analysezeit (14 min) die vollständige Trennung des α-Tocopherol-Peaks von anderen. Es zeigte sich, daß die Proben ohne Verzögerungen aufgearbeitet werden sollten. Nach Probenaufarbeitung können diese für mindestens 56 Tage in flüssigem Stickstoff gelagert werden.