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DOI: 10.1055/s-0031-1299862
Quantification of Procyanidins in Oral Herbal Medicinal Products Containing Extracts of Crataegus Species
Publikationsverlauf
Publikationsdatum:
26. Dezember 2011 (online)
Summary
According to the European Pharmacopeia a photometric assay is used for the estimation of procyanidins in Crataegi fructus. This assay is also most commonly used for procyanidin analysis in herbal medicinal products (HMPs) containing extracts of hawthorn (Crataegus species). In order to find an appropriate method for the determination of oligomeric and polymeric procyanidins by analysing various preparations containing extracts of Crataegus, the Ph. Eur.- method was compared to an HPLC- method with chemical reaction detection (HPLC-CRD-method) and another conventional photometric assay using 4-dimethylamino-cinnamic-aldehyde (DMACA).
Total procyanidins estimates obtained with the pharmacopeial method were, depending on the reference standard used, at least more than 50 % higher than those obtained with the DMACA-assay. The determination of individual procyanidins could only be achieved by HPLC-CRD. Monomeric, dimeric, and trimeric procyanidins could be separated and detected individually, whereas no HPLC separation was possible for higher polymeric compounds. However, these compounds could be analysed as co-eluting groups. Using the DMACA method for the estimation of total oligomeric procyanidins and the HPLC-CRD method for quantification of the monoup to trimeric procyanidins, some market leading herbal medicinal products from Germany containing extracts Crataegus species (C. monogyna Jacq., C. laevigata D.C., C. pentagyna Waldst. et Kit., C. nigra Waldst. et Kit, C. azarolus L.) were analysed.
Procyanidin B2 (epicatechin-(4β→8)-epicatechin) was isolated from Aesculus hippocastanum fruit shells as reference standard for calibration purposes. The structure elucidation was carried out by by means of MS and 1H-NMR. Quantitative 1H-NMR spectroscopy (qNMR) was applied for purity assessment
Zusammenfassung
Quantifizierung von Procyanidinen in Crataegus-Extrakte enthaltenden oralen Fertigarzneimitteln
Zur quantitativen Bestimmung oligomerer Procyanidine (PC) kann derzeit nur die offizinelle spektrophotometrische Konventionsmethode der Monographie „Weißdornfrüchte” des Europäischen Arzneibuches herangezogen werden. Deshalb wird diese Methode häufig auch zur Procyanidin-Quantifizierung in pharmazeutischen Zubereitungen verwendet, die Extrakte aus „Weißdornblätter mit Blüten” enthalten.
Werden die Procyanidine zur Beurteilung der pharmazeutischen Qualität und Stabilität eines Crataegus-Extraktes bzw. eines daraus hergestellten Fertigarzneimittels herangezogen, sind nicht nur der Gesamtgehalt an PC, sondern auch der Anteil an monobis trimeren PC entscheidend. Durch Vergleich der im Ph. Eur. offiziellen Methode mit zwei weiteren Methoden zur PC-Bestimmung, einer HPLC-Methode mit Nachsäulenderivatisierung (HPLC-CRD) und einer photometrischen Konventionsmethode nach Reaktion mit Dimethylaminozimtaldehyd (DMAZA), sollten geeignete Methoden zur Bestimmung von oligomeren und polymeren PC in Crataegus-Extrakten und daraus hergestellten Zubereitungen evaluiert werden.
Bei den zur Abschätzung des PC-Ge-samtgehalts geeigneten Methoden lieferte die Ph.-Eur.-Methode, in Abhängigkeit vom verwendeten Standard, über 50 % höhere Werte als die DMAZA-Methode. Nur mit der HPLC-CRD Methode konnten die einzelnen monobis trimeren PC einzeln bestimmt werden, während PC höheren Polimerisierungsgrades nicht aufgetrennt werden konnten.
Unter Verwendung der DMAZA-Me-thode und der HPLC-CRD-Methode wur-den marktführende Crataegus species (C. monogyna Jacq., C. laevigata D.C., C. pentagyna Waldst. et Kit., C. nigra Waldst. et Kit, C. azarolus L.) enthaltende Fertigarzneimittel analysiert. Die Kombination beider Methoden erlaubte sowohl eine Abschätzung des Gesamtgehalts an PC als auch eine Differenzierung der Procyanidin-Fraktion in monomere, oligomere und polymere Procyanidine.
Procyanidin B2 (epicatechin-(4β→8)-epicatechin) wurde aus den Fruchtschalen von Aesculus hippocastanum L. isoliert und als Kalibrierstandard verwendet. Die Identität wurde mittels Massenspektrometrie und 1H-NMR, die Reinheit mittels quantitativer 1H-NMR bestimmt.