Depletion von neutrophilen Granulozyten aus induziertem Sputum mittels Antikörper-gebundener Beads und Sieb-Trennsystem

Einleitung: Durch Sputuminduktion lassen sich wenig invasiv Zellen aus den Atemwegen gewinnen. Um Sputum Makrophagen/Monozyten aus gut charakterisierten Patientengruppen für die präklinische in-vitroTestung neuer Substanzen heranzuziehen, werden für das Sputum geeignete Zellisolationsverfahren benötigt. In dieser Untersuchung haben wir mit dem neu entwickelten pluriBead-Verfahren^® (Pluriselect) zunächst die Effizienz der Depletion von neutrophilen Granulozyten aus Sputum getestet.

Methodik: Bislang wurden Sputen von 6 gesunden Probanden nach LPS Provokation gewonnen, dass bedingt durch die LPS induzierte Atemwegsentzündung, einen besonders hohen Anteil an neutrophilen Granulozyten aufweist. Um die Effizienz der Depletion von Lymphozyten und Neutrophilen zu testen, wurden die Zellen nach Homogenisation (Dithiothreitiol, DTT) 30min unter sanfter Rotation mit CD3 und CD15 gekoppelten Beads inkubiert. Danach wurden die Zellen durch ein 30µm Sieb gegeben und eine Zelldifferenzierung im Eluat durchgeführt.

Ergebnisse: Der Median (IQR) der Anteile der neutrophilen Granulozyten vor der Aufreinigung lag bei 71,2 (66,1; 81,6) %. Nach der Aufreinigung reduzierte sich dieser Anteil auf 2,4 (1,2; 14) %. Der Anteil der Lymphozyten wurde nicht reduziert. CD3 konnte auch in der Durchflusszytometrie nicht im Sputum nachgewiesen werden.

Zusammenfassung: Das Pluriselect-Verfahren eignet sich für die Depletion von neutrophilen Granulozyten aus Sputumproben und ermöglicht so eine schnelle und effektive Aufreinigung der Makrophagen/Monozyten Fraktion. Ob eine Depletion der relativ kleinen Anteile von Lymphozyten im Sputum durch CD4/8 Beads besser gelingt, muss noch getestet werden. Darüber hinaus sind Untersuchungen erforderlich, um den Aktivierungsgrad der Makrophagen nach Aufreinigung und damit deren Eignung als in-vitro Testsystem zu überprüfen.