The role of cFLIP in acute, immune-mediated liver failure

Einleitung: Das anti-apototische Protein cFLIP hemmt die Aktivierung von Caspase 8 und die Deletion des cFLIP Gens resultiert in embryonaler Letalität. Wir haben in gezeigt, das die Leber-sepzifische Deletion von cFLIP zur verstärkten Schädigung nach Aktivierung von Apoptosesignalwegen mit CD95/Apo-1 und TNF führt. Interessanterweise zeigen diese Tiere keinen spontanen Phänotyp.

Methoden: Um die Bedeutung von cFLIP in vivo zu untersuchen, haben wir cFLIP unter der Kontrolle eines Tamoxifen (Tam)-sensiblen Östrogen Rezeptors, der die Expression von Cre im Cre-loxP System kontrolliert in allen Zellen zum Zeitpunkt 8 Wochen nach der Geburt deletiert (ER-cre:FLIP).

Ergebnisse: Nach Injektion von Tam kommt es in ER-Cre:cFLIP Mäusen zu einem Anstieg der Serumtransaminasen, der beim Wildtyp nicht zu beobachten ist (ER-cre:FLIP vs. wildtyp: 20716 vs. 13U/l; p<0,001). Im Verlauf von 120 Stunden versterben 90% ER-Cre:FLIP Mäuse, während die Mortalität beim wt nicht erhöht ist. Histologisch zeigen sich apoptotische Zellen in der Leber, der Milz und dem Kolon, während das Herz, die Nieren und das Gehirn nicht betroffen sind. Nach Injektion von Tam kann in der Leber von ER-cre:FLIP Mäusen eine Aktivierung von Caspase 3 und 8, Aktivierung von JNK und TUNEL positive Hepatozyten nachgewiesen werden. Die Schädigung wird durch Vorbehandlung mit dem Pancaspase-Inhibitor zVAD signifikant reduziert. Weiterführend haben wir die mechanistische Beteiligung von cFLIP defizienter immunkompetenten Zellen untersucht. Durch Transplantation von Wildtyp Knochenmark in ER-cre FLIP Mäuse war die Schädigung, Aktivierung von Caspasen und die Mortalität signifikant reduziert, während in Wildtyp Mäusen nach Transplantation von ER-cre:FLIP Knochenmark keine Schädigung zeigte.

Zusammenfassend führt die Deletion von cFLIP in 8 Wochen alten Mäusen zu einem akuten Leberversagen, dass durch Aktivierung von Caspase-abhängiger Apoptose entsteht. Diese Schädigung lässt sich durch Rekonstitution mit Wildtyp Knochenmark hemmen, so dass ein Immun-vermittelter Mechanismus der Leberschädigung in empfänglichen Hepatozyten anzunehmen ist.