TRAIL induziert in Pankreastumorzelllinien durch RelA eine CCL20 abhängige Immunzellrekrutierung und hierdurch eine Apoptoseresistenz in den Tumorzellen

Einleitung: Der Transkriptionsfaktor NF-kB hat entscheidenden Anteil an der Therapieresistenz des duktalen Pankreasadenokarzinom (PDAC). Obwohl sich die Mehrzahl der Arbeiten auf die am häufigsten untersuchte p65/RelA NF-kB-Untereinheit fokussieren, sind sowohl die Mechanismen als auch die hieran beteiligten Zielgene kaum verstanden.

Ziele: Identifikation der NF-kB Zielgene, die RelA abhängig in TRAIL resistenten PDAC Zelllinien induziert werden und deren Einfluss auf die Apoptoseresistenz.

Methodik: TRAIL resistente Panc-1, PancTu1 und Patu8988 t oder TRAIL sensitive MiaPaca2 Zelllinien wurden mit RelA spezifischen oder Kontroll siRNA transfiziert und mit TRAIL behandelt. Die im Vergleich zwischen den sensitiven und resistenten Zelllinien am divergentesten durch TRAIL im Expressionsarray induzierten Gene wurden anschließend im Hinblick auf die RelA Abhängigkeit und ihre Funktionalität untersucht.

Ergebnisse: Eine genomweite Expressionsanalyse an RelA- bzw. Kontroll siRNA transfizierten PDAC-Zelllinien erbrachte den Nachweis, dass CCL20 in den resistenten PDAC Zelllinien das am stärksten TRAIL induzierbare RelA-Zielgen ist. Realtime-PCR und ELISA bestätigten die RelA Abhängigkeit der CCL20 Induktion. Zur Verifizierung der klinischen Relevanz erfolgte der immunhistochemische Nachweis einer erhöhten CCL20 Expression im PDAC an Patientenmaterial. Mittels EMSA, Luciferase- und ChIP-Analyse gelang es die Funktionalität einer RelA-Bindungsstellen im CCL20 Promotor nachzuweisen. Weder die Reduktion der CCL20 Expression mittels siRNA noch die pharmakologische Hemmung des CCL20 Rezeptors CCR6 hatte jedoch eine Auswirkung auf das Apoptoseverhalten. Vielmehr konnte in einem ex vivo Kokultur-Modell mit PBMCs gezeigt werden, dass CCL20 nach einer TRAIL Behandlung eine vermehrte Migration und Differenzierung der PBMCs bewirkte, die ihrerseits in den PDAC Zelllinien eine Apoptoseresistenz gegenüber TRAIL induzierten.

Schlussfolgerung: CCL20 repräsentiert das am stärksten TRAIL induzierbare RelA Zielgen in TRAIL resistenten PDAC-Zelllinien, das aber keinen direkten Anteil an der TRAIL Resistenz der Tumorzellen hat. CCl20 induziert eine durch die Tumorzellen hervorgerufene Immunantwort, die ihrerseits eine verstärkte Apoptoseresistenz der PDAC-Zellen hervorruft.