Zusammenfassung
1. Es wird versucht, durch Ausnutzung der unter Bedingungen endogener Atmung ablaufenden Stoffwechselprozesse eine Markierung von Mykobakterien mit P32 vorzunehmen.
2. Es wird der Einfluß der Inkubationszeit auf den P32 -Einbau untersucht. 24 h sind für die Markierung ausreichend. Bei längeren Inkubationszeiten werden zwar höhere spezifische Aktivitäten erreicht, die Ausbeute wird aber durch auto-lytische Prozesse vermindert.
3. Durch Einsatz von Fermentinhibitoren läßt sich nachweisen, daß für den Einbau ein intakter Stoffwechsel notwendig ist.
4. Von der eingebauten P32 -Aktivität wurden nach der Fraktionierung etwa 35% in der säurelöslichen und 60% in der Nukleinsäure-Fraktion gefunden.
5. Die Einbaurate wächst proportional der vorgelegten P32 -Menge. Nach 24 h sind ungefähr 78% eingebaut, 10% verbleiben im Suspensionsmedium und ~ 0,5% werden mit dem Waschwasser ausgewaschen. Der Rest entzieht sich wahrscheinlich durch Adsorptionseffekte dem Nachweis.
6. Die Vorteile dieses Verfahrens für eine rationelle Markierung von Mykobakterien werden diskutiert. Die einzusetzende P32 -Menge läßt sich für jede Problemstellung und für die gewünschte Impulsrate berechnen.
Summary
1. An attempt has been made to label mycobacteria with P32 using metabolic processes under conditions of endogenous respiration.
2. The effects of incubation time on P32 uptake have been studied. 24 hours are sufficient for labelling. Although longer incubation periods result in higher specific activities, the yield is decreased due to autolytic processes.
3. Using enzyme inhibitors it could be demonstrated that uptake is dependent on an uninterrupted metabolism.
4. Following fractionation about 35% of the accumulated P32 activity was found in the acid soluble and 60% in the nucleic acid fraction.
5. The rate of uptake increases proportionally to the amount of P32 used initially. After 24 hours about 78% are incorporated. 10% remain in the suspension medium and about 0.5% are found in the washings. The remainder could not be recovered, probably due to adsorption effects.
6. The advantages of this procedure for an economic labelling of mycobacteria are discussed. The initial amount of P32 could be calculated for each experiment and desired counting rate.
Résumé
1. On a essayé de marquer des mycobactéries avec du P32 en utilisant les procès du métabolisme qui se déroulent sous condition de la respiration endogène.
2. L’influence du temps d’incubation sur l’incorporation de P32 est étudiée. 24 heures sont suffisantes pour le marquage. Par un temps d’incubation prolongé on obtient, c’est vrai, des activités spécifiques élevées, mais le rendement est réduit par des procès autolytiques.
3. Par l’emploi d’inhibiteurs de ferment on peut montrer que pour l’incorporation un métabolisme intact est nécessaire.
4. Le fractionnement fait, on a trouvé, à peu près 35% de l’activité incorporée de P32 dans la fraction soluble en acides et 60% dans celle de l’acide nucléique.
5. Le taux d’incorporation accroît proportionellement à la quantité de P32 donnée. Après 24 heures, à peu près 78% sont incorporés, 10% restent dans le milieu de suspension et à peu près 0,5% sont ôtés avec l’eau à laver. Le reste ne pouvait plus être trouvé, probablement à cause d’effets d’adsorption.
6. Les avantages de ce procédé d’un marquage rationnel de mycobactéries sont discutés. La quantité de P32 à donner peut être calculée pour chaque expérience et pour le taux d’impulsion qu’on veut atteindre.
