Trennung der Strahlenschädigungsprodukte von Insulin-¹³¹J und Untersuchung ihrer Eigenschaften

Zusammenfassung

Durch Gelfiltration von ¹³¹J-signiertem Rinderinsulin auf Sephadex G 50 und G 75 können drei radioaktive Hauptkomponenten (I, II und III) scharf voneinander getrennt werden. Die Strahlenschädigungsprodukte I und III neh-men in Abhängigkeit von der spezifischen Aktivität des Insulins und von der Zeit nach der Markierung des Insulins zu. Aus dem Verhalten der Komponenten I, II und III bei der Gelfiltration auf Sephadex, bei der Ultrazentrifugation und der Fällung mit Trichloressigsäure kann geschlossen werden, daß es sich bei I um ein großmolekulares (MG < 150 000, > 70 000) Strahlenschädigungsprodukt, bei II um intaktes Insulin und bei Komponente III um kleinmolekulare Spalt-produkte (MG ~ 600) von Insulinmolekülen handelt. Das intakte Rinderinsulin der Komponente II wird im Gegensatz zu I und III durch spezifische Antikörper gebunden und besitzt biologische Insulinaktivität. Das Verfahren ist geeignet, um intaktes Rinderinsulin-¹³¹J, wie es zur immunologischen Insulinbestimmung im Blut und zum Nachweis insulinbindender Antikörper benötigt wird, von strahlen-geschädigtem Insulin zu trennen.

Gelfiltration of iodine-labelled insulin on Sephadex G 50 and G 75 can be utilized for separation of intact insulin from radiation-damaged insulin. Three radioactive components (component I, II, III) were separated. The quantity of damaged insulin in component I and III increased with specific radioactivity and the time after preparation of iodine-labelled insulin.

The behaviour of radiation damaged insulin in gelfiltration on Sephadex, ultracentrifugation and precipitation by trichloracetic acid shows that component I corresponds to a damage product of heigh molecular weight, component III to split products of insulin of low molecular weight. Only the radioactive component II contains intact insulin which is bound by insulin-specific antibodies and possesses blood-sugar decreasing activity in intact mice.

La filtration au gel de l’insuline marquée par l’iode au moyen de Séphadex G 50 et G 75 peut être employée pour la séparation de l’insuline intacte de l’insuline endommagée par la radiation. Trois composants radioactifs (composant I, II, III) ont été séparés. La quantité de l’insuline endommagée dans les composants I et III augmente avec la radioactivité spécifique et avec le temps après la préparation de l’insuline iodée.

Dans la filtration au gel au moyen de Séphadex, l’ultracentrifugation et la précipitation par l’acide trichloracétique, la conduite de l’insuline endommagée par la radiation montre que le composant I est un produit de fusion de poids moléculaire élevé (<150 000, >70 000), et que le composant III est un produit de fission de l’insuline avec un poids moléculaire moindre (~ 600). Il n’y a que le composant radioactif II qui contient de l’insuline intacte capable d’être liée par des anticorps spécifiques et possédant l’activité biologique de l’insuline.

^* Mit Unterstützung der Deutschen Forschungsgemeinschaft.

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