Analyse des second-hit Mutationsprofils in BRCA1-assoziierten, Hormonrezeptor und HER2neu negativen Mammakarzinomen (TNBC)

Zielsetzung:

Das triple-negative Mammakarzinom (TNBC) ist eine aggressive Brustkrebsart und durch das Fehlen der Hormonrezeptoren für Östrogen und Progesteron, sowie durch einen negativen HER2/neu-Status schwer zu therapieren. Ca. 15% der TNBC sind assoziiert mit einer prädisponierenden Keimbahnmutation in den Brustkrebsgenen BRCA1 oder BRCA2. Ziel des Projekts ist es durch eine Sequenzanalyse potentiell an der Tumorentwicklung und -progression beteiligter Gene BRCA1-assoziierte second-hit Mutationen im TNBC zu identifizieren.

Materialien/Methoden:

Aus archivierten TNBC-Gewebeproben von BRCA1-Mutationsträgerinnen wird invasiv-tumoröses Gewebe makrodissektiert und mittels des GeneRead DNA FFPE Kits (Qiagen) DNA isoliert. Nach Bestimmung der DNA-Qualität durch den QIAseq DNA QuantiMIZE Assay werden kodierende Zielregionen von 93 Genen unter Verwendung des Human Breast Cancer QIASeq DNA Panel (DHS-001Z) angereichert. Die Library wird mit einer Realtime-PCR-basierten Methode quantifiziert (QIAseq Library Quant Assay). Die Sequenzanalyse erfolgt auf einem Miseq-Sequenziersystem (Illumina). Abschließend werden die Daten mit der Bioinformatik-Software Biomedical Genomics Workbench (Qiagen) ausgewertet.

Ergebnisse:

In einem Kollektiv von 106 TNBC-Patientinnen ohne positive Familienanamnese wurden mittels TruRisk ^TM-Panel-Analyse acht (7,55%) BRCA1-Mutationsträgerinnen identifiziert. Das Erkrankungsalter der BRCA1-Mutationsträgerinnen lag zwischen 33 und 55 Jahren. In 49 TNBC-Gewebeproben von insgesamt 41 BRCA1-Keimbahnmutationsträgerinnen konnte Tumorgewebe mit einem Tumorzellanteil von > 30% detektiert werden. Die DNA-Isolierung wurde hinsichtlich der quantitativen Ausbeute optimiert. Die Qualitätsprüfung ergab eine DNA-Amplifizierbarkeit im relevanten Größenbereich und damit eine für die NGS-Analyse ausreichende Qualität. Ergebnisse der laufenden NGS-Analysen und der bioinformatischen Auswertung werden nach Klassifizierung bzw. Pathogenitätsbeurteilung der Varianten vorgestellt.

Zusammenfassung:

Die erfolgreiche Etablierung des Workflows bietet die Möglichkeit durch eine Mutationsanalyse potentieller Kandidatengene den Genotyp des BRCA1-assoziierten TNBCs zu analysieren.