Schneller Nachweis von clarithromycinresistenten Helicobacter pylori in der Magenbiopsie mittels Real-Time-PCR

Zusammenfassung

Hauptursache für das Versagen einer Helicobacter-pylori-Eradikationstherapie ist die Clarithromycinresistenz. Die hierfür verantwortlichen Punktmutationen können durch ein Real-Time-PCR-Verfahren innerhalb weniger Stunden nachgewiesen werden. Wir haben ein solches Verfahren (LightCycler-PCR) im Routinelabor etabliert und mit dem Standardverfahren für Erregernachweis und Resistenztestung, der Kultur, verglichen. Aus 69 von 102 Biopsien wurde H. pylori angezüchtet. Alle kulturell positiven Proben wurden durch die PCR bestätigt. 5 kulturell negative Proben waren in der PCR positiv: Hier wurden die PCR-Befunde durch den C¹³-Harnstoff-Atemtest bestätigt. Somit betrugen Sensitivität und Spezifität der PCR für den Nachweis von H. pylori in der Biopsie jeweils 100 %. Bei 26 von 68 Proben ergab die kulturelle Empfindlichkeitsprüfung eine Clarithromycinresistenz. Davon wiesen 24 Proben eine resistenzkodierende Punktmutation auf. Bei je einer der 68 Proben ergab sich im Vergleich zur Kultur ein falsch resistentes bzw. falsch empfindliches PCR-Ergebnis. Bei einem kulturell resistenten Stamm wies die PCR zusätzlich den sensiblen Wildtyp nach, während bei zwei kulturell sensiblen Stämmen zusätzlich eine resistente Mutante erkannt wurde. Die Clarithromycinresistenz wurde durch die PCR mit einer Sensitivität von 96,2 % und einer Spezifität von 97,6 % nachgewiesen. Das Ergebnis der Real-Time-PCR bietet somit eine zeitnahe Entscheidungshilfe bei der Verordnung einer Eradikationstherapie.

Abstract

The main cause for failure of Helicobacter pylori eradication therapy is resistance to clarithromycin which is due to point mutations. The use of real-time PCR allows the detection of these mutations directly on biopsy specimens within a few hours. In our routine laboratory, we compared LightCycler PCR to conventional detection and susceptibility testing of H. pylori by culture. PCR showed a positive result for H. pylori in 74 specimens. PCR was confirmed by culture in 69 specimens. In five specimens which were positive by PCR but negative on culture the ¹³C urea breath test confirmed the PCR results. Sensitivity and specificity of our LightCycler assay for the detection of H. pylori in biopsy specimens were both 100 %. In 26 out of 68 specimens conventional susceptibility testing yielded resistance to clarithromycin. Corresponding point mutations were found in 24 of these specimens. Compared to culture, PCR gave a false-resistant, respectively, a false sensitive result in one specimen each. In another specimen, culture yielded a resistant strain whereas PCR detected both a resistant mutant and the wild-type strain. From two other specimens clarithromycin-sensitive strains were cultured but both a wild-type strain and a mutant were detected by PCR. Sensitivity and specificity of LightCycler PCR for resistance to clarithromycin were 96.2 % and 97.6 %, respectively. This assay had an accuracy comparable to culture and could be performed within 3 hours, allowing it to be used before the administration of H. pylori eradication therapy.

Schlüsselwörter

Helicobacter pylori - Clarithromycinresistenz - Punktmutation - Biopsie - Polymerase Kettenreaktion

Key words

Helicobacter pylori - clarithromycin - drug resistance - point mutation - polymerase chain reaction - biopsy specimen

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