Bildgebung der HSP70-Expression von 3 unterschiedlichen Tumorzelllinen in Korrelation mit der Vitalität der Zellen

Ziele: Bildgebung der HSP70 Protein Expression bei drei Tumorzelllinien, die thermischem Stress ausgesetzt waren, in Korrelation mit der Überlebenrate der Zellen. Methode: Drei Tumorzelllinien, humane Melanomzellen M21, Plattenepithelkarzinomzellen SCCVII und Fibromzellen NIH3T3 wurden stabil mit dem Plasmid pHsp70A1-luc transfiziert. Die basale HSP70 Expression wurde bei 2×106 Zellen bestimmt. Die Zellen bei 38°C, 40°C, 42°C, 44°C, 46°C, 48°C, 50°C für 20 Minuten im Wasserbad erwärmt. Mit einer CCD Kamera (IVIS, Xenogen Corp., Alameda, CA) erfolgte die Luciferaseaktivitätsbestimmung vor und in 2h Abständen nach dem Erhitzen. In einem zweiten Experiment erfolgt die Vitalitätbestimmung der erhitzten Zellen mittels Flusszytometrie. Die Vitalität wurde 4h nach Hitzeexposition bestimmt. Ergebnis: SCCVII-HSP70-Luc Zellen zeigten die geringste Hitzetoleranz. 8h nach einer Hitzeexposition von 44°C ließ eine 40000 fache HSP70 Expression nachweisen. NIH3T3 Zellen zeigten die höchste HSP70 Expression (800000%). M21 Zellen zeigten die höchste Hitzetoleranz. Bei diesen Zellen was die höchste HSP70 (7000%) Expression bei 48°C 48h später nachweisbar. Bei der höchsten HSP70 Expression waren noch 60% -80% der Zellen vital. Bei einer geringen Temperaturerhöhung (2°C) sank die HSP70 Expression um 90% mit dem Nachweis von nur noch 10% vitalen Zellen. Schlussfolgerung: Unterschiedliche Zelllinen habe eine unterschiedliche HSP70 Expression. Je hitzeresistenter die Zellen sind um so länger dauert es bis eine HSP70 Expression bei erhöhten Temperaturen auftritt. Die Temperaturtoleranz der Zellen liegt in einem geringen Temperaturbereich.

Korrespondierender Autor: Hundt WH

Institut für Klinische Radiologie, Marchioninistraße 15, 81375, München

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Key words

HSP70 Expression - Luciferase - Optische Bildgebung - Tumorzellen