Curosurf steigert in vivo die Phagozytose apoptotischer neutrophiler Granulozyten durch Alveolarmakrophagen

Hintergrund: Die Phagozytose apoptotischer neutrophiler Granulozyten durch Alveolarmacrophagen ist in der Lunge ein Bestandteil der Auflösung der Entzündungsreaktion. Die Phagozytose wird durch Annexin V vermittelt, das auf apoptotischen Vesikeln exprimiert wird. Apoptotische Vesikel, die nicht rasch phagozytiert werden, werden nekrotisch und sind somit selbst ein proinflammatorischer Stimulus. Die Phagozytose apoptotischer Vesikel durch Makrophagen wird in vitro durch Phospholipide und hydrophobe Surfactantproteine erhöht. Fragestellung: Erhöht die intratracheale Instillation von Curosurf die Phagozytose von apoptotischen neutrophilen Granulozyten durch Alveolarmakrophagen in Mäusen?

Methoden: Neutrophile Granulozyten wurden mittels Percoll Gradienten isoliert. Erythrozyten wurden lysiert. Die Reinheit wurde durch Färbung für Myeloperoxidase (MPO), die in neutrophilen Granulozyten experimiert wird, überprüft. Apoptose wurde durch Bestrahlung mit UV-Licht (302 nm) für 30min induziert, was durch Färbung für Annexin V und Propiumjodid in der Durchflusszytometrie überprüft wurde. Drei Monate alte, männliche C57/Black 6 Mäuse wurden sediert und intubiert. Curosurf in einer Dosis von 200mg/kg oder 50µl physiologische Kochsalzlösung wurden intratracheal instilliert. Anschließend wurden 10 hoch 6 apoptotische neutrophile Granulozyten in einem Volumen von 100µl oder physiologische Kochsalzlösung injiziert (n=9 in jeder Gruppe). Eine bronchoalveoläre Lavage (BAL) wurde nach 30min durchgeführt. Alveolarmakrophagen und neutrophile Granulozyten wurden gezählt. Isolierte Zellen wurden für MPO gefärbt, um phagozytierte apoptotische neutrophile Granulozyten in den Alveolarmakrophagen zu identifizieren. Die Anzahl der phagozytierten apoptotischen Vesikeln pro Alveolarmakrophage, und der Prozentsatz der Alveolarmakrophagen mit aufgenommenen apoptotischen Vesikeln wurde bestimmt. Das Produkt aus der Anzahl der phagozytierten apoptotischen Vesikel pro Alveolarmakrophage und dem Prozentsatz der MPO positiven Alveolarmakrophagen wurde als Phagozytoseindex berechnet.

Ergebnisse: Weniger als 10% (3,1±2,0×10 hoch 4) der instillierten apoptotischen neutrophilen Granulozyten wurden nach 30min durch BAL isoliert. Der Phagozytoseindex nach physiologischer Kochsalzinjektion war 3,8±0,9 im Vergleich zu 7,5±1,1 nach Curosurf Instillation (p<0,05). Die Anzahl der Alveolarmakrophagen nach physiologischer Kochsalzinstillation war 2,4±0,1×10 hoch 5 /kg im Vergleich zu 20,1±4,1×10 hoch 5/kg nach Curosurf Instillation (p<0,05).

Schlussfolgerung: Die Surfactant Instillation erhöhte die Anzahl der Alveolarmakrophagen und die Phagozytose von apoptotischen neutrophilen Granulozyten in vivo. Die antiinflammatorischen Wirkungen der Surfactanttherapie können zum Teil durch die erhöhte Anzahl an Alveolarmakrophagen und deren gesteigerte Phagozytose von apoptotischen neutrophilen Granulozyten zustande kommen.