Die Messung der Luminol-abhängigen Chemilumineszenz zur Bestimmung der spontanen Aktivität von peripheren Blut-Monozyten am Beispiel von Multiple Sklerose-Patienten und gesunden Probanden*

Zusammenfassung

Wir untersuchten den Einfluß von HEPES-Puffer, Mahlzeiten, der Temperatur und des pH-Wertes auf die spontane Aktivität des »respiratory burst« (RB) peripherer Blut-Monozyten (MO) von Gesunden und MS-Patienten. Als Meßmethode wurde die Luminol-abhängige Chemilumineszenz (CL) angewendet. Unsere Untersuchungen zeigten, dass Zellen im Medium ohne HEPES-Puffer höhere CL-Aktivität besaßen als solche, die sich in Medium mit HEPES-Puffer befanden. Während bei 5-20 mM HE-PES etwa gleiche Aktivitätsminderungen gefunden wurden, kam es zu einem deutlichen weiteren Abfall im Medium mit 40 mM HEPES. Zusätzlich änderte sich bei 40 mM HEPES das Verhältnis der Aktivitäten von Gesunden und MS-Patienten. Die Messungen vor und nach den Mahlzeiten zeigten jeweils nach dem Frühstück und nach dem Mittagessen einen Abfall der CL-Aktivität; bei nüchternen Probanden fanden sich hingegen zumindest zwischen 7 und 9 Uhr geringe Aktivitätsänderungen. Wurden die Zellen bei Raumtemperatur oder 37 °C separiert oder gelagert, führte dies zu einer deutlichen Reduktion der CL-Aktivität - insbesondere bei MO von MS-Patienten. Andererseits fiel die CL-Aktivität bei 0-4 °C zumindest während 5stündiger Lagerung nicht ab. Bezüglich des pH-Wertes ergab sich ein mit dem pH-Anstieg von pH 6 und 8 einhergehender Anstieg der CL-Aktivität. Unter Berücksichtigung der genannten Kriterien ergab sich bei der Untersuchung von 17 gesunden Spendern ein Mittelwert von 1356 Impulsen/10 s. eine Standardabweichung von 211 und ein Variationskoeffizient von 79,8.

Summary

We tested the influence of HEPES buffer, meals, temperature, and pH on the spontaneous chemiluminescence (CL) activity of peripheral blood monocytes of healthy volunteers and MS patients. It turned out that cells in a medium without HEPES buffer had a higher CL activity than those in a medium with HEPES buffer. The reduction in CL activity was most pronounced in a medium with 40 mM HEPES, whereas the results were almost constant or at least similar at concentrations between 5 and 20 mM. Furthermore, the ratio of CL activity of MS patients and healthy donors changed at 40 mM HEPES. Measurements of CL activity before and after meals showed a decrease of the activity after breakfast and lunch. CL measurements of donors who had not eaten anything showed slight changes at least between 7 to 9.00 a. m. Treatment of the cells at room temperature or 37 °C led to clear reductions of CL activity, especially in MS patients. At 0 to 4 °C CL activity, however, did not decrease for at least 5 hours. Increasing pH values of the medium were found to increase the spontaneous CL activity, too, at least up to pH 8. Considering all these possible influences on spontaneous CL activity we examined 17 healthy donors. The examination revealed a mean value of 1356 counts/10 s, a standard deviation of 211, and a coefficient of variation of 79.8.