Funktionelle Beurteilung erythrozytärer Antikörper durch photometrischen Nachweis der Erythrophagozytose im Monozyten Monolayer Assay (MMA)

Zusammenfassung

Beim Morbus Haemolyticus Neonatorum (MHN) ist das In-vivo-Verhalten erythrozytärer lgC-Antikörper von besonderer Wichtigkeit. Der Monozyten Monolayer Assay (MMA) - bei dem die Zahl der durch Monozyten phagozytierten Erythrozyten mikroskopisch ermittelt wird - gilt als wichtiger funktioneller Test zur qualitativen Beurteilung erythrozytärer lgG-Antikörper. Wir haben einen photometrischen MMA etabliert und ihn mit dem mikroskopischen MMA verglichen. Es wurden in beiden Tests kommerzielle Rhesus-Antikörperseren eingesetzt und 8 Seren von Schwangeren mit mildem und schwerem Verlauf von MHN im photometrischen MMA gemessen. Es zeigte sich eine gute Übereinstimmung zwischen dem mikroskopischen und photometrischen MMA (r = 0,93). Darüber hinaus korrelierte der photometrische MMA in 7 von 8 Fällen bei einer falsch-positiven Bestimmung mit dem Verlauf des MHN. Die photometrische Technik erlaubt eine schnelle, sensitive und reproduzierbare Bestimmung der Erythrophagozytose in Mikrotiterplatten. Grundlage dieses Verfahrens ist der photometrische Nachweis des Hämoglobins phagozytierter Erythrozyten über eine Peroxidase-Reaktion. Der standardisierte photometrische MMA könnte bei geringem Intra- und Inter-Assay- Fehler künftig insbesondere bei MHN zur funktionellen Charakterisierung erythrozytärer Antikörper eine breitere Anwendung finden.

Abstract

In haemolytic disease of newborn (erythroblastosis fetalis) the in vivo behaviour of erythrocytic IgG antibodies is of particular significance. The monocyte monolayer assay (MMA), which determines by microscopy the number of erythrocytes phagocytosed by monocytes, is an important functional test for the qualitative assessment of erythrocytic IgG antibodies. We set up a Photometric MMA and compared it with the microscopic MMA. In both tests we employed commercially available rhesus antibody sera and examined 8 sera of pregnant women with mild and severe courses of haemolytic disease of newborn by the Photometric MMA. Good agreement was found between the microscopic and Photometrie MMA (r = 0,93). Over and above this the Photometric MMA correlated with the course of haemolytic disease of newborn in 7 out of 8 cases (with one false-positive finding). The Photometric technique permits rapid, sensitive and reproducible determination of erythrophagocytosis in microtitre plates. This method is based on the Photometric detection of haemoglobin of phagocytosed erythrocytes via a peroxidase reaction. Standardised Photometrie MMA could in future be more widely applied especially in haemolytic disease of newborn for the functional characterisation of erythrocytic antibodies, the incidence of intra-assay and inter-assay errors being low.