Einfluß der menschlichen Follikelflüssigkeit auf die Reife von Kanincheneizellen unter In-vitro-Bedingungen

Zusammenfassung

Es wurde der Einfluß von menschlicher Follikelflüssigkeit reifer und unreifer Eizellen auf die Ausreifung von Kaninchenoozyten unter In-vitro-Bedingungen untersucht. Die menschlichen Follikelflüssigkeiten wurden während Laparoskopien für extracorporale Befruchtung gewonnen und nach reifen und unreifen Eizellen unterteilt.

Bei einer normalen frühen Embryonalentwicklung wurde die Follikelflüssigkeit als »Follikelflüssigkeit einer reifen Eizelle« bezeichnet, während bei unreifen oder degenerierten Oozyten von »Follikelflüssigkeit einer unreifen Eizelle« gesprochen wurde.

Kaninchenoozyten wurden 3 Std. nach P-LH-Gabe durch Follikelpunktion gewonnen und gleich in 3 verschiedenen Kulturmedien für 7 Std. kultiviert.

Bei Oozyten, die in Brackett's Defined Medium mit Zusatz von 20%iger Follikelflüssigkeit einer unreifen Eizelle für 7 Std. kultiviert wurden, haben nur 6 von 50 Oozyten die Prometaphase II bis Metaphase II erreicht. Dies entspricht einer Rate von 12%, während bei Zusatz von Follikelflüssigkeit einer reifen Eizelle 18 von 50 Oozyten die gleiche Phase erreichen konnten, was einer Rate von 36% entspricht. Diese Differenz ist statistisch signifikant (p <0,01). Gleichzeitig diente Brackett's Defined Medium ohne Zusatz von menschlicher Follikelflüssigkeit zur Kontrolle. Lediglich 5 von 50 Oozyten konnten die Prometaphase II bis Metaphase II erreichen. Hier betrug die Rate 10%.

Zum Nachweis, daß sich die gewonnenen Kaninchenoozyten in der Phase der Chromatinverdichtung befanden, wurden die Oozyten gleich nach der Gewinnung (3 Std. nach P-LH-Applikation) fixiert und in 5%-Giemsalösung gefärbt. Hier waren alle untersuchten Oozyten (31) in der Chromatinverdichtungsphase.

Als Vergleich für die Oozyten, die die Metaphase II erreicht haben, wurden tubare Eizellen (13 Std. nach P-LH-Injektion) gewonnen, umgehend fixiert und in 5%-Giemsalösung gefärbt. Hier befanden sich alle Oozyten (48) in Metaphase II und zeigten einen Polarkörper.

Diese Untersuchung zeigt, daß lediglich menschliche Follikelflüssigkeit einer reifen Eizelle, im Gegensatz zu Flüssigkeiten von unreifen oder atresierten Eizellen, die Reifungsvorgänge von Kaninchenoozyten positiv beeinflußt.

Abstract

The influence of human follicular fluid from mature and immature oocytes on the maturation of rabbit oocytes under in-vitro conditions was examined. The human follicular fluids were obtained in the course of laparoscopies for extracorporeal insemination and separated into the categories mature and immature ova.

In cases of normal early embryonal development the follicular fluid was termed “follicular fluid of a mature ovum”; if the ova were immature or degenerated the fluid was termed “follicular fluid of an immature ovum”.

Rabbit oocytes were obtained 3 hours after administration of P-LH and immediately cultivated in 3 different culture media for 7 hours.

Only 6 out of 50 rabbit oocytes cultivated in Brackett's Defined Medium with the addition of 20% follicular fluid from an immature human ovum for 7 hours reached prometaphase II to metaphase II. This corresponds to a rate of 12%; on the other hand, with the addition of follicular fluid from a mature ovum 18 out of 50 oocytes reached the same phase, i.e., a rate of 36%. This difference is statistically significant (p <0.01). Brackett's Defined Medium with no fluid added was used as a control. Only 5 out of 50 oocytes managed to reach prometaphase II to metaphase II. The rate in this case was 10%.

In order to prove that the rabbit oocytes were in the chromatin consolidation phase, they were fixed immediately after being obtained (3 hours after P-LH administration) and stained in 5% Giemsa solution. All of the oocytes (31) were in the chromatin consolidation phase. For the purpose of comparison with the oocytes which reached metaphase II, tubal oocytes were obtained (13 hours after P-LH injection), fixed without delay, and stained in a 5% Giemsa solution. All of these oocytes (48) were in metaphase II and had a polar body.

This study shows that only human follicular fluid from a mature ovum, as opposed to fluids from immature or blighted ova, has a positive influence on the maturation processes of rabbit oocytes.