Zusammenfassung:
Gegenstand und Ziel: Das Ziel dieser Arbeit war die Untersuchung zweier spektralphotometrischer Methoden zur Messung des freien Hämoglobins (fr. Hb) (Methoden nach Harboe und Kahn) auf ihre Eignung beim Pferd und die Bestimmung des Referenzwerts des fr. Hb im Plasma von Pferden. Material und Methoden: Von 188 klinisch gesunden Pferden unterschiedlichen Geschlechts und Alters wurde heparinisiertes Blutplasma mittels UV/Vis-Spektralphotometer Beckman-Coulter DU 640 B unter Verwendung von Halbmikro- Einmalküvetten auf fr. Hb untersucht. Eine sorgfältige Punktion der V. jugularis externa und seitliches Hineinfließen in ein Lithiumheparinröhrchen verhindert die iatrogene Hämolyse. Die gewonnenen heparinisierten Blutproben müssen nach der Entnahme 30 Minuten bei Zimmertemperatur stehen. Der Plasmaüberstand wird danach fünf Minuten bei 1100 g zentrifugiert. Als die spektrale Absorption beeinflussende Faktoren wurden Pferdemyoglobin aus dem Skelettmuskel, Bilirubin-Isomere und ein hyperlipämisches Serum eingesetzt. Ergebnisse: Der Vergleich beider Bestimmungsmethoden zeigt, dass sich die Methode nach Kahn für das Pferd eignet. Die zentrifugierten Heparinplasmaproben können ohne Beeinflussung des Messergebnisses zwei Tage bei 4 °C gelagert werden. Eine Lagerung der Plasmaproben bei –20 °C für drei Monate ist ebenfalls möglich. Zwischen 0,21 und 105 μmol/l besteht eine Linearität der Konzentration des fr. Hb. Das Messergebnis wird durch Myoglobin (bis 176 μmol/l), Bilirubin (bis 152,7 μmol/l) und hyperlipämisches Serum (Triglyzeride bis 5,71 mmol/l) nicht beeinflusst. Der Referenzbereich für fr. Hb im Plasma adulter, gesunder Pferde liegt im Bereich zwischen 0,09 und 2,01 μmol/l (95%-Konfidenzintervall) bei einem Median von 0,80 μmol/l. Schlussfolgerung und klinische Relevanz: Die Methode nach Kahn erwies sich für das Pferd als geeignet. Freies Hämoglobin ist ein Parameter für die Diagnose intravaskulärer Hämolyse als Folge einer Septikämie, Endotoxämie oder nach Bluttransfusion, wobei der Referenzbereich für fr. Hb im Plasma adulter, gesunder Pferde zwischen 0,09 und 2,01 μmol/l liegt.
Summary:
Objective: This study was aimed to evaluate a suitable method for free haemoglobin (fr. Hb) measurement in plasma of horses using as references two simple spectrophotometric methods from human medicine (method of Kahn and Harboe) and to determine normal reference value of plasma fr. Hb in horses. Material and methods: The study included 188 healthy horses of different age and sex. UV/Vis-Spectrophotometer Beckman-Coulter DU 640 B and half micro single-use cuvettes were used for measurement of fr. Hb. Blood was collected from the V. jugularis externa and drawn into the wall of the lithium-heparinized blood collecting tube to avoid in-vitro haemolysis. After standing of heparinized plasma samples for 30 minutes at room temperature, supernated plasma was centrifuged at 1,100 g for five minutes. To determine the influence of spectral absorption, equine myoglobin from skeletal muscle, bilirubin-isomers and hyperlipemic serum were used. Results: The method of Kahn is suitable for use in equine medicine. The centrifuged plasma samples can be stored at refrigerated temperature (4 °C) for two days and at –20 °C for three months. To analyse the characteristics of the method and comparison of the methods, linearity, accuracy of the method and influence of risk factors were examined. There is linearity of fr. Hb concentration from 0.21 to 105 μmol/l. No influence of bilirubin (up to 152.7 μmol/l), myoglobin (up to 176 μmol/l) and lipemic serum (triglyceride up to 5.71 mmol/l) was detected in this measurement. Physiological reference value of fr. Hb in plasma of adult healthy horses is between 0.09 and 2.01 μmol/l (95% confidence interval) with the median of 0.80 μmol/l. Conclusion and clinical relevance: The method of Kahn is a suitable method for the measurement of fr. Hb in equine medicine. Fr. Hb is a valuable parameter for the diagnosis of intravascular haemolysis due to endotoxemia, septicaemia and blood transfusion. The reference range in plasma of adult healthy horses is 0.09–2.01 μmol/l.
Schlüsselwörter:
Anämie - Hyperbilirubinämie - intravasale Hämolyse
Key words:
Anemia - hyperbilirubinemia - intravascular haemolysis
