Einleitung:
Exosomen, Virus-große Vesikel, tragen die Proteine ihrer Elternzellen und modifizieren Immunzellfunktionen. Hier untersuchen wir, ob sich Exosomen von Humanem Papillomvirus-positiven (HPV+) oder HPV-negativen (HPV-) HNC-Zelllinien durch ihr molekulares oder immunregulatorisches Profil unterscheiden.
Methoden:
Konzentrierte Überstände von 3 HPV+ (SCC- 2, SCC-47, SCC-90) und 2 HPV- (PCI-13, PCI-30) HNC-Zelllinien wurden auf Sepharose-basierenden Größenaustauschsäulen aufgetragen. Exosomen in Fraktion#4 wurden auf Morphologie und Größe mittels Elektronenmikroskopie (TEM) und Proteingehalt mittels BCA untersucht. Proteinprofile wurden durch Western Blots und Massenspektrometrie ermittelt. Der Einfluss der Exosomen auf Immunfunktionen wurde in Kokulturexperimenten mit menschlichen T-Zellen gemessen.
Ergebnisse:
Exosomen aller Zelllinien waren hinsichtlich Größe (30 – 150nm) und Proteingehalt (2 – 10ug/mL) vergleichbar. HPV+ Zelllinien und Exosomen exprimierten E6, E7 & p16. Immunmodulierende Moleküle (TGFß, FasL, HSP70) waren in allen Exosomen gleich stark präsent. Massenspektrometrie und Genexpressionsanalysen zeigten, dass regulierende Energiestoffwechselwege doppelt so häufig in HPV+ Exosomen vorkommen (p < 0.0001), während Zellwachstum und Immunantworten in HPV- Exosomen überwiegen. Keine Unterschiede wurden hinsichtlich der Apoptoseinduktion aktivierter T-Zellen oder der Suppression von Aktivierung & Proliferation durch HPV+ und HPV- Exosomen beobachtet.
Schlussfolgerungen:
HPV+ Exosomen tragen virale Antigene und besitzen andere Proteomprofile als HPV- HNC Exosomen, während die Immunsuppression vergleichbar ist. Exosomen spiegeln den HPV-Status ihrer Elternzellen wider und könnten somit zukünftig als Plasmabiomarker für eine HPV-Infektion im HNC dienen.
