Auswirkungen von Decitabin auf Cancer-Testis Antigen Expression in Kopf-Hals-Tumor Zelllinien

Einleitung:

Behandlung mit Decitabin (DAC) reduziert die DNA-Methylierung des Genoms. Die Expression der Cancer-Testis-Antigene (CTA) wird u.a. durch die Methylierung ihrer Promotoren reguliert. Demethylierung der DNA kann die CTA-Expression steigern, was eine CTA-spezifische Immuntherapie ermöglichen könnte. Unser Hauptziel war es, die Wirkung von DAC auf die CTA-Expression in Kopf-Hals-Krebszelllinien (HNSCC) in vitro sowie die Korrelation zwischen Promotor-Methylierung und RNA Expression von CTA zu untersuchen.

Methoden:

HNSCC Zelllinien (4 HPV+, 4 HPV-) wurden 5 Tage mit 2µM DAC behandelt. Zelluläre DNA und RNA wurden isoliert und für die Pyrosequenzierung und qRT-PCR von CTA-Genen (MAGE-A3, NY-ESO-1, PRAME) im Vergleich zu unbehandelten Zellen eingesetzt. Zellproliferation wurde mit dem xCELLigence RTCA DP-Instrument gemessen.

Ergebnisse:

DAC-Behandlung führte zu einer erhöhten Expression von MAGE-A3, NY-ESO-1 und PRAME in allen Zelllinien. Während für MAGE-A3 und NY-ESO-1 eine erhöhte Expression mit einer reduzierten Promotormethylierung assoziiert war, war dies bei PRAME nicht der Fall. Unbehandelte HPV+ Zelllinien exprimierten alle drei CTA-Gene im Vergleich zu HPV- Zelllinien kaum, aber die DAC-Behandlung erhöhte die CTA-Expression signifikant. Die Proliferation dagegen beeinflusste DAC nicht signifikant.

Schlussfolgerung:

Die Expression und Methylierung von CTA-Genen unterscheidet sich zwischen HPV+ und HPV- Zelllinien. Die DNA-Promotor-Demethylierung von MAGE-A3 und NY-ESO-1 korreliert mit einer Erhöhung der RNA-Expression. Da DAC ein unspezifischer Inhibitor der DNA-Methylierung ist, könnte auch die Demethylierung der Enhancer zur Überexpression beitragen. Die Hochregulation der CTA-Expression durch DAC-Behandlung könnte die Immunogenität von HNSCC erhöhen.

Jasmin Ezic

Universitätsklinikum Ulm/HNO Forschungslabor,

Frauensteige 14a, Haus 18, 89075

Ulm

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Publikationsverlauf

Publikationsdatum:
23. April 2019 (online)