Ziel/Aim Invasive Mykosen stellen eine lebensgefährliche Komplikation bei Patienten mit hämatologischen Erkrankungen dar, wobei eine frühzeitige Diagnostik essentiell für deren Überleben ist. Wir untersuchten hier das Potential von Tc-99 m-Amphotericin B (Tc-99 m-AMB), pathogene Schimmelpilze zu detektieren.
Methodik/Methods [Tc-99 m]pertechnetat (1 GBq in 350 µL NaCl) wurde zu 50 µg AMB in 100 µl HBSS gegeben, gefolgt von 20 µL 10 mg/mL SnCl2 in 0,1 N HCl. Nach 20 min Inkubation bei 25 °C wurde die Lösung durch Zugabe von 3 mL PBS neutralisiert und sterilfiltriert. Zur Vorbereitung des Transwell-Modells wurden pulmonale Endothelzellen auf der Unterseite eines Transwell-Einsatzes gemäß zuvor veröffentlichten Protokollen ausgesät (1) und mit Sporen unterschiedlicher Schimmelpilze infiziert. Nach einer Inkubation von 15 h wurde 50 ng/mL Tc-99 m-AMB dem Medium hinzugefügt. Die Einsätze wurden 2 h in der Tracer-Lösung inkubiert und anschließend mit HBSS gewaschen. Danach wurde die aufgenommene Aktivität mithilfe eines Gamma-Counters gemessen. Analog präparierte Einsätze wurden mittels Autoradiographie analysiert.
Ergebnisse/Results Die durch TLC bestimmte radiochemische Ausbeute und Reinheit von Tc-99 m-AMB erreichten < 98 % bzw. < 99 %. Die unspezifische Aufnahme in nicht oder mit Bakterien infizierten Einsätzen war vernachlässigbar. Bei Aspergillus fumigatus- und Rhizopus arrhizus-infizierten Einsätzen wurde eine inokulumabhängige Zunahme der Aufnahme beobachtet, mit einer Nachweisgrenze von 25,000 bzw. 250 Pilzzellen. Die quantitativen Ergebnisse wurden durch autoradiographische Bildgebung validiert. Des Weiteren konnte eine erhöhte Anreicherung in Rhizomucor pusillus und Cunninghamella bertholletiae gezeigt werden.
Schlussfolgerungen/Conclusions Unsere in vitro-Ergebnisse zeigen das Potential von Tc-99 m-AMB als Tracer zur Erfassung pathogener Schimmelpilzen auf und ermutigen eine weitreichende in vivo Evaluierung.
