Nachweis der Überexpression des Insulinrezeptorgens in Larynxkarzinomzellen mittels Differenzial-Display-Methode[1]

Zusammenfassung

Hintergrund: Der Insulinrezeptor (IR) ist ein wichtiges Protein, das auf der Membran der meisten Zellen lokalisiert ist. Er gehört zur Familie der Tyrosinkinase-Wachstumsfaktor-Rezeptoren. Insulin vermittelt proliferative Antworten in verschiedenen Krebszellen, jedoch ist die Bedeutung von IR für die Tumorentstehung nicht ganz genau bekannt. Methode: Es wurde die mRNA aus Mundschleimhautkeratinozyten und Larynxkarzinomzellen mit dem Enzym Reverse Transkriptase in cDNA umgeschrieben, mit einer Vielzahl von Oligonukleotiden in der PCR amplifiziert und die entstehenden Produkte nachfolgend elektrophoretisch aufgetrennt. Ergebnisse: Es konnte beim Vergleich des Elektrophoresemusters der beiden Zellarten die Überexpression eines 127 Basenpaar (bp) Fragmentes in Larynxkarzinomzellen detektiert werden. Nach Klonierung und Sequenzierung dieses Fragmentes wurde übereinstimmende Homologie mit Sequenzen des Exon-2 des Insulinrezeptorgens gefunden. Die Überexpression des IR-Gens in Larynxkarzinomzellen wurde in Northern-Hybridisierung bestätigt. Schlussfolgerungen: Diese Ergebnisse zeigen, dass die Expression der IR mRNA in Larynxkarzinomzellen hochreguliert wird. Daraus lässt sich schließen, dass die Anzahl der IR in Larynxkarzinomzellen höher ist als in benignen Schleimhautkeratinozyten und deswegen Insulin bei der Entstehung oder Progression der Larynxkarzinome eine Rolle spielt.

Detection of Overexpression of the Insulin Receptor Gene in Laryngeal Carcinoma Cells by Means of the Differential Display Method

Background: The insulin receptor (IR) is an essential protein localized on the surface of almost all cell types. IR belongs to the tyrosine-kinase growth factor receptor family. Insulin mediates proliferative responses in a variety of tumor cells, however, the role of the IR molecule in carcinogenesis has not yet exactly been established. Methods: Messenger RNA from mucosal keratinocytes and laryngeal carcinoma cells were transcribed in cDNA using reverse transcriptase and amplified by PCR by means of a number of oligonucleotides. PCR products were analyzed electrophoretically. Results: Comparing the electrophoretic pattern of both cell types the overexpression of a 127 bp fragment could be detected in laryngeal carcinoma cells in contrast to benign keratinocytes. Cloning and sequencing this fragment exact homologous match was found with exon-2 of the IR gene. The overexpression of the IR gene in laryngeal carcinoma cells was confirmed by Northern hybridization. Conclusions: The results show up-regulation of IR-mRNA in laryngeal carcinoma cells suggesting that the number of IR is enhanced in these cells. Hence it follows, that the overexpression of IR plays a possible role in laryngeal cancer initiation and/or progression.

Schlüsselwörter:

Genexpression - Insulinrezeptor - Plattenepithelkarzinom

Key words:

Gene expression - Insulinreceptor - Squamous cell carcinoma

01 Herrn Prof. Dr. med. Heinrich Rudert zum 65. Geburtstag gewidmet.

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01 Herrn Prof. Dr. med. Heinrich Rudert zum 65. Geburtstag gewidmet.