Zusammenfassung
Ziel: Mesenchymale Stammzellen (MSC) sind eine viel versprechende Zellquelle für die zelluläre Kardiomyoplastie. Wir haben kürzlich eine neue spezifische Methode, basierend auf der Aptamer-Technik, zur Isolation von MSC beschrieben. Die so isolierten Zellen stehen unmittelbar nach der Isolation „frisch” zur Transplantation zur Verfügung. In der vorliegenden Arbeit wird die Detektion mittels MRT von frisch isolierten und hiernach intrakoronar und intramyokardial transplantierten MSC evaluiert. Hierbei wird erstmals der Einsatz einer kombinierten Aptamer-basierten Isolations- und Markierungstechnik für Zellen beschrieben. Material und Methoden: Knochenmark (KM) wurde von gesunden Schweinen entnommen, die Tiere wurden getötet und das Herz in ein Ex-vivo-Perfusionsmodell überführt. Während der kalten Ischämiezeit wurden die MSC aus dem KM mittels MSC-spezifischen Aptameren, an die Dynabeads® gekoppelt waren, innerhalb von 2 h immunomagnetisch isoliert. Zur histologischen Identifikation wurden die Zellen zusätzlich mit PKH26 angefärbt. Ca. 3 × 106 frisch Aptamer-isolierte Zellen wurden in den Ramus interventricularis anterior (RIVA), 5 × 105 Zellen wurden direkt intramyokardial, nachdem ein Defekt im bewussten Areal gesetzt wurde (Kryo-Narbe), appliziert. 3 × 106 der Aptamer-isolierten Zellen wurden einer weiteren Charakterisierung (FACS sowie Differenzierungsprozeduren) zugeführt. 20 h nach stattgehabter Zell-Transplantation erfolgten MRT-Untersuchungen des Herzens mittels eines klinisch eingesetzten 3,0-T-Ganzkörper-Scanners (Magnetom Trio, Siemens, Deutschland). Im Anschluss wurden histologische Untersuchungen durchgeführt. Ergebnisse: Durchschnittlich wurden 7 × 106 Zellen aus 120 ml KM isoliert. Die Zellen wurden in Kultur genommen und zeigten MSC-typische Eigenschaften. In der MRT konnten reproduzierbare Suszeptibilitätsartefakte von überraschend exzellenter Qualität im RIVA-Perfusionsareal sowie in der Kryo-Narbe generiert werden. Die histologischen Untersuchungen der Biopsien zeigten PKH26-positive Zellen in den Bereichen, die in der MRT positiv waren, wohingegen in den Kontrollbiopsien (negativ in der MRT) keine Zellen nachweisbar waren. Schlussfolgerung: Die immunomagnetische Isolation von MSC mittels an spezifische Aptamere gekoppelte Magnetpartikel ist einfach durchführbar, effektiv und kombiniert spezifische Zellseperations- und Markierungstechniken im Sinne einer „One stop shop”-Strategie.
Abstract
Purpose: Mesenchymal stem cells (MSC) seem to be a promising cell source for cellular cardiomyoplasty. We recently developed a new aptamer-based specific selection of MSC to provide “ready to transplant” cells directly after isolation. We evaluated MRI tracking of newly isolated and freshly transplanted MSC in the heart using one short ex vivo selection step combining specific aptamer-based isolation and labeling of the cells. Materials and Methods: Bone marrow (BM) was collected from healthy pigs. The animals were euthanized and the heart was placed in a perfusion model. During cold ischemia, immunomagnetic isolation of MSC from the BM by MSC-specific aptamers labeled with Dynabeads® was performed within 2 h. For histological identification the cells were additionally stained with PKH26. Approx. 3 × 106 of the freshly aptamer-isolated cells were injected into the ramus interventricularis anterior (RIVA) and 5 × 105 cells were injected directly into myocardial tissue after damaging the respective area by freezing (cryo-scar). 3 × 106 of the aptamer-isolated cells were kept for further characterization (FACS and differentiation assays). 20 h after cell transplantation, MRI of the heart using a clinical 3.0 Tesla whole body scanner (Magnetom Trio, Siemens, Germany) was performed followed by histological examinations. Results: The average yield of sorted cells from 120 ml BM was 7 × 106 cells. The cells were cultured and showed MSC-like properties. MRI showed reproducible artifacts within the RIVA-perfusion area and the cryo-scar with surprisingly excellent quality. The histological examination of the biopsies showed PKH26-positive cells within the areas which were positive in the MRI in contrast to the control biopsies. Conclusion: Immunomagnetic separation of MSC by specific aptamers linked to magnetic particles is feasible, effective and combines a specific separation and labeling technique to a “one stop shop” strategy.
Key words
cardiomyoplasty - aptamer - mesenchymal Stem Cells - MRI - tracking
References
hp.wendel@uni-tuebingen.de
