Evaluation de la méthode d'amplification de l'ADN (PCR, polymerase chain reaction) pour le diagnostic de l'herpès oculaire superficiel

Diagnose der Herpes-simplex-Infektion durch die Polymerase Genamplifikation (Polymerase Chain Reaction)

Die „Polymerase chain reaction” (PCR) ist eine molekularbiologische Methode, die sehr geringe Deoxynukleinsäure (DNS) Mengen nachzuweisen vermag, und die in verschiedenen klinischen Situationen erfolgreich gebraucht wird. Wir haben die PCR als diagnostische Methode bei Augenoberflächen-Herpes getestet und mit der Viruskultur als Kontrollmethode verglichen. Nach einem Hornhaut- oder Bindehautabstrich wurde das Gewebe proteolytisch behandelt. Die gewonnene virale DNS wurde durch zwei sequentielle PCR mit zwei Paaren Sonden amplifiziert, spezifisch für HSV 1&2 (Nested pimers PCR). Reaktionsprodukte waren 90 Basenpaare DNS Fragmente. Unsere Studie umfaßte 38 Patienten, davon 23 mit sicherer (n=14) oder verdächtiger (n=9) klinischer Herpes-Simplex-Diagnose und 15 klinisch negative Kontrollfälle (13 Hornhautfremdkörper und zwei Adenovirus Keratoconjunctivitiden). Alle kulturpositiven Fälle waren auch mit der PCR Methode positiv (insgesamt 10 Fälle). In der Gruppe mit atypischer Präsentation war ein Fall mit beiden Methoden positiv; vier Fälle, die gut auf antivirale Therapie ansprachen, waren kulturnegativ, doch positiv mit der PCR-Methode. Vier Fälle waren mit beiden Methoden negativ. Alle Gegenproben waren negativ bis auf zwei Fremdkörperfälle. Verglichen mit der Viruskultur, berechneten wir eine Sensibilität von 100% und eine Spezifizität von 87.5%. Folglich scheint die PCR eine empfindliche und spezifische diagnostische Methode bei Oberflächenherpes zu sein, die speziell bei fraglichen Fällen nützlich ist.

Summary

We evaluated the polymerase chain reaction (PCR) as a diagnostic method in superficial corneo-conjunctival herpes and compared it to viral culture. A total of 38 patients were included and divided into 3 groups according to the clinical aspect. Fourteen patients that had a typical clinical aspect for herpes served as reference to evaluate the method. Nine patients had atypical lesions (herpes-suspects) and 15 patients (13 foreign corneal bodies and 2 adenovirus keratoconjunctivitis) made up the control group. All culture positive cases were also positive with the PCR method (in total 10 cases). In the group of herpes-suspects, one case had both a positive viral culture and a positive PCR; four patients that responded well to antiviral therapy had a negative culture and a positive PCR and four patients were negative with both methods. In the control group two cases of foreign bodies were false-positive. As culture was not performed for these cases it is impossible to know if it was a contamination during the PCR procedure or if concomittant viral shedding occured. Compared to viral culture, a sensitivity of 100% and a specificity of 87.5% was calculated. PCR seems to be a very sensitive diagnostic method having an acceptable specificity for the diagnosis of superficial ocular herpes simplex disease that proved useful in atypical cases.