Relative Effectiveness of ⁷⁵Se and ¹²⁵I as Labels for Rabbit Anticanine Urokinase

Summary

⁷⁵Se-labelled antiurokinase was isolated from the sera of rabbits which had received a series of canine urokinase injections followed, approximately 10 days before harvesting of the antibody fraction, by a single injection of ⁷⁵Se as sodium selenite. An antibody fraction was also isolated from the sera of rabbits treated identically except for the omission of the canine urokinase from the injection series. Specific activity of the γ-globulin fraction of animals actively forming antiurokinase was considerably higher than that of the nonantiurokinase γ-globulin. When injected into mongrel pups, the radioactivity of the γ-globulin fraction containing antiurokinase was found predominantly in the kidney with the cortex of the organ possessing from 5 to 6 times as much activity per gram as kidney medulla. The radioactive antibodies from control animals appeared to be distributed among the various tissues examined in a random fashion with the activity of kidney cortex and kidney medulla being approximately equal. It is concluded that the kidney cortex constitutes a major site of storage, and possibly formation, of urokinase.

Iodination of comparable rabbit γ-globulin fractions with ¹²⁵I resulted in complete loss of specificity and in their failure to bind to tissues. The exact mode of incorporation of ⁷⁵Se into the proteins of animals to which it is supplied as the inorganic selenite has not been elucidated. However, this radioactive tag does find its way into proteins where it remains firmly bound throughout the procedures involved in antibody purification and upon being injected into a recipient animal.

L’anti-urokinase marquée au ⁷⁵Se fut isolée du sérum de lapin, lequel avait reçu une série d’injections d’urokinase canine suivie d’une seule injection de ⁷⁵Se sous la forme de selenite de sodium approximativement dix jours avant la récupération de la fraction anticorps. Cette fraction anticorps fut isolée aussi des sérums de lapins traités identiquement sauf pour l’omission des séries d’injections d’urokinase canine. L’activité spécifique de la fraction gammaglobuline d’animaux qui formaient de l’anti-urokinase activement fut considérablement plus élevée que celles de la gamma-globuline non anti-urokinase. Quand elle fut injectée chez des chiots, la radio-activité de la fraction-gammaglobuline contenant de l’anti-urokinase fut trouvée surtout dans le rein. Dans le cortex de cet organe, on a trouvé 5 à 6 fois plus d’activité par gramme que dans la substance médulaire du rein. Les anticorps radioactifs des animaux témoins semblent être distribués dans différents tissus examinés au hasard et où il s’est révèlé que le rapport de l’activité rénale médulaire et corticale était égale. Il en fut conclu que le cortex du rein constitue l’endroit majeur du stockage et peut-être de la formation de l’urokinase.

L’iodination de la fraction globulaire du lapin au ¹²⁵I a résulté dans une perte complète de la spécificité et de la capacité de se fixer aux tissus. Le mode exact d’incorporation du ⁷⁵Se dans les protéïnes des animaux auxquels il fut administré de la selenite inorganique ne fut pas établi. Cependant ce marqueur radio-actif trouve son chemin dans les protéines où il reste fermement lié pendant les procédés de purification d’anticorps et aussi après injection dans un animal receveur.

⁷⁵Se-markierte Antiurokinase wurde aus dem Serum von Kaninchen isoliert, die eine Reihe von Hundeurokinase-Injektionen erhalten hatten und danach, ungefähr 10 Tage vor der Isolierung der Antikörperfraktion, eine Einzelinjektion von ⁷⁵Se als Natriumselenit. Weiters wurde eine Antikörperfraktion aus dem Serum von Kaninchen isoliert, die ebenso behandelt worden waren, jedoch die Serie der Hundeurokinase-Injektionen nicht erhielten. Die spezifische Aktivität der Gammaglobulin-Fraktion der Tiere, die aktiv Antiurokinase bildeten, war beträchtlich höher als jene des Gammaglobulin ohne Antiurokinase. Wenn das Material in junge Hunde injiziert wurde, dann fand sich die Radioaktivität der Antiurokinase enthaltenden Gammaglobulin-Fraktion vorwiegend in der Niere, wobei die Rinde 5-bis 6mal soviel Aktivität pro Gramm enthielt als das Nierenmark. Die radioaktiven Antikörper der Kontrolltiere waren zwischen den verschiedenen untersuchten Geweben nach einem Zufallsmuster verteilt, wobei die Radioaktivität in Nierenrinde und Nierenmark ungefähr gleich war. Daraus wird geschlossen, daß die Nierenrinde eine bedeutende Lagerungs- und möglicherweise Bildungsstätte der Urokinase ist.

Jodierung von vergleichbaren Kaninchen-Gammaglobulin-Fraktionen mit ¹²⁵I ergab einen vollkommenen Verlust der Spezifität und des Gewebebindungsvermögens. Der Einbaumechanismus des ⁷⁵Se in die Eiweiße der Tiere, denen es als anorganisches Selenit zur Verfügung gestellt wurde, konnte nicht geklärt werden. Jedoch findet dieses Radioisotop seinen Weg in Eiweiße, an die es während der Antikörperreinigung und nach Injektion in das Versuchstier fest gebunden bleibt.

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