Zielsetzung:
Das triple-negative Mammakarzinom (TNBC) ist eine aggressive Brustkrebsart und durch
das Fehlen der Hormonrezeptoren für Östrogen und Progesteron, sowie durch einen negativen
HER2/neu-Status schwer zu therapieren. Ca. 15% der TNBC sind assoziiert mit einer prädisponierenden
Keimbahnmutation in den Brustkrebsgenen BRCA1 oder BRCA2. Ziel des Projekts ist es durch eine Sequenzanalyse potentiell an der Tumorentwicklung
und -progression beteiligter Gene BRCA1-assoziierte second-hit Mutationen im TNBC zu identifizieren.
Materialien/Methoden:
Aus archivierten TNBC-Gewebeproben von BRCA1-Mutationsträgerinnen wird invasiv-tumoröses Gewebe makrodissektiert und mittels des
GeneRead DNA FFPE Kits (Qiagen) DNA isoliert. Nach Bestimmung der DNA-Qualität durch den QIAseq DNA QuantiMIZE Assay werden kodierende Zielregionen von 93 Genen unter Verwendung des Human Breast Cancer QIASeq DNA Panel (DHS-001Z) angereichert. Die Library wird mit einer Realtime-PCR-basierten Methode quantifiziert
(QIAseq Library Quant Assay). Die Sequenzanalyse erfolgt auf einem Miseq-Sequenziersystem (Illumina). Abschließend werden die Daten mit der Bioinformatik-Software Biomedical Genomics Workbench (Qiagen) ausgewertet.
Ergebnisse:
In einem Kollektiv von 106 TNBC-Patientinnen ohne positive Familienanamnese wurden
mittels TruRisk
TM-Panel-Analyse acht (7,55%) BRCA1-Mutationsträgerinnen identifiziert. Das Erkrankungsalter der BRCA1-Mutationsträgerinnen lag zwischen 33 und 55 Jahren. In 49 TNBC-Gewebeproben von insgesamt
41 BRCA1-Keimbahnmutationsträgerinnen konnte Tumorgewebe mit einem Tumorzellanteil von > 30%
detektiert werden. Die DNA-Isolierung wurde hinsichtlich der quantitativen Ausbeute
optimiert. Die Qualitätsprüfung ergab eine DNA-Amplifizierbarkeit im relevanten Größenbereich
und damit eine für die NGS-Analyse ausreichende Qualität. Ergebnisse der laufenden
NGS-Analysen und der bioinformatischen Auswertung werden nach Klassifizierung bzw.
Pathogenitätsbeurteilung der Varianten vorgestellt.
Zusammenfassung:
Die erfolgreiche Etablierung des Workflows bietet die Möglichkeit durch eine Mutationsanalyse
potentieller Kandidatengene den Genotyp des BRCA1-assoziierten TNBCs zu analysieren.
