Rationale und rationelle Enterovirus-Diagnostik [¹]

Grundproblematik und Fragestellung: Der Standard bei der Diagnose Enterovirus-bedingter Erkrankungen ist der Erregernachweis mittels Virusisolierung in Zellkultur. In der Liquordia-gnostik hat der schnelle Virusnachweis anhand der reversen Transkriptase-Polymerasekettenreaktion (RT-PCR) die Virusisolierung aufgrund der höheren Sensitivität in den Hintergrund gedrängt. Die serologische Diagnose wird zumeist mit der Komplementbindungsreaktion (KBR) gestellt. Ein neuer Enzymimmuntest zum Nachweis von Anti-Enterovirus-IgM-Antikörpern (IgM-EIA) erlaubt eine schnellere Diagnose anhand eines Einzelserums.

Methodik: Es wurden mehrere Methoden zum Virusnachweis aus Stuhl, Abstrichmaterial und Liquor (Virusisolierung in Zellkultur und RT-PCR) und zum Antikörpernachweis in Serum (IgM-EIA und KBR) miteinander verglichen. Die klinischen Materialien stammten vorwiegend von Kindern unter 10 Jahren, die häufig an seröser Meningitis oder grippeähnlichen Symptomen bzw. Enteritiden erkrankt waren. Bei einem Kollektiv (K1) waren nur eine Stuhlprobe bzw. Rachenabstrich pro Patient vorhanden (n = 154), während bei dem anderen (K2) sowohl Liquor als auch mindestens eine Serumprobe und darüber hinaus sporadisch eine Stuhlprobe zur Verfügung standen (n = 164).

Ergebnisse: In K1 konnten 32 × Enteroviren, 2 × Rotavirus aus Stuhl- oder Rachenabstrichproben und 1 × Rotavirus aus Stuhl- oder Rachenabstrichproben und 1 × Herpes-simplex-Virus aus Rachenabstrich isoliert werden. Die RT-PCR war 55 × positiv für Enteroviren und 5 × falsch negativ bei positiver Virusisolierung. In K2 konnte 43 × Enterovirus-Nukleinsäure im Liquor nachgewiesen werden. Parallel durchgeführte serologische Untersuchungen zeigten bei 15 Patienten positive IgM-Werte während nur in 9 Fällen erhöhte KBR-Titer nachzuweisen waren.

Folgerungen: Sich ergänzende Untersuchungen von Liquor-, Stuhl-, Abstrich- und Serumproben anhand der möglichen Kombination von Virusisolierung, RT-PCR und IgM-EIA, ermöglichen eine verbesserte Diagnose von Enterovirus-assoziierten Erkrankungen. Für Liquoruntersuchungen ist die RT-PCR die Methode der Wahl. Die serologische Diagnose sollte durch den Virusnachweis in einer Stuhl- oder Abstrichprobe abgesichert werden.

Rational and effective diagnosis of enterovirus disease

Background and objective: Demonstration of the causative pathogen by isolating the virus in cell culture is taken as the standard in the diagnosis of diseases caused by enterovirus. When diagnosing the virus in cerebrospinal fluid (CSF), isolation of the virus has been largely replaced by the rapid demonstration of the virus using the reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR), because of its greater sensitivity. The serological diagnosis is mostly made with the complement binding reaction (CBR). A new enzyme immunoassay for demonstrating anti-enterovirus IGM antibodies (IgM-EIA) allows a more rapid diagnosis from a single serum sample. It was the aim of this study to compare the diagnostic value of these various tests.

Method: Several methods for demonstrating virus from faeces, swabs and CSF (virus isolation in cell culture and RT-PCR) and of antibodies in serum (IgM-EIA and CBR) were compared. The cli-nical material was obtained largely from children under the age of 10 years, many of whom had serous meningitis, flu-like sym-ptoms or enteritis. In one cohort (C1), only stool or throat swabs were available for each of 154 patients. In the other cohort (C2) of 164 patients, CSF and at least one serum sample were available in addition to occasional stool samples.

Results: From C1 enteroviruses were isolated from 32 patients, rotavirus twice from stool or throat swab and rotavirus once from stool or throat swab, and herpes simplex once from throat swab. RT-PCR was positive 55 times for enterovirus, five times false-negative when the virus had been isolated. In C2 enterovirus nucleic acid was demonstrated in 43 patients from CSF. Parallel serological tests gave positive IgM values for 15 patients, while CBR titres were raised in nine.

Conclusions: Complementary tests of CSF, stool, swabs and serum samples by all possible combinations of viral isolation, RT-PCR and IgM-EIA improve the diagnosis of enterovirus-associated diseases. RT-PCR is the method of choice. The serological diagnosis should be confirmed by the demonstration of virus in stool or swab.

46 Die Evaluierungsdaten im Verlauf der Entwicklung des Enterovirus IgM-EIA wurden bereits in J Med Virol 2000; 61: 221-227 veröffentlicht.

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46 Die Evaluierungsdaten im Verlauf der Entwicklung des Enterovirus IgM-EIA wurden bereits in J Med Virol 2000; 61: 221-227 veröffentlicht.

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